تجزیه و تحلیل مراحل و مسائل برای اضافه کردن نمونه های الیزا

مراقبت باید انجام شود برای جلوگیری از همولیز شدید در درجه اول. هموگلوبین حاوی گروه هم است که فعالیت مشابه پراکسیدها را دارد. بنابراین، در تعیین الایزا با HRP به عنوان آنزیم برچسب دار، اگر غلظت هموگلوبین در نمونه سرم بالا باشد، جذب به فاز جامد در فرایند پرورش آسان است، بنابراین برای واکنش با بستر HRP اضافه شده بعد برای توسعه رنگ. نمونه های سرم جدا شده توسط عمل آسپتیک را می توان در 2 ~ 8 درجه سانتی گراد به مدت یک هفته ذخیره می شود، و ذخیره سازی یخ زده توصیه می شود اگر باکتری ها درگیر هستند. نمونه ها باید برای مدت طولانی زیر ۷۰- درجه سانتی گراد نگهداری شوند. جمع آوری نمونه و جداسازی سرم باید توجه برای جلوگیری از آلودگی باکتریایی تا آنجا که ممکن است، رشد باکتریایی، ترشح آن از برخی آنزیم ها ممکن است آنتیژن ها، آنتی بادی ها و دیگر پروتئین ها اثر تجزیه؛ از سوی دیگر، برخی آنزیم های درون زا باکتریایی مانند β-گالاکتوزیداز اشریشیا کلی، خود باعث تداخل غیرمتشخص با اندازه گیری برچسب دار با آنزیم مربوطه خواهند شد. در صورت کثافات یا فلوکلنت های ناشی از آلودگی باکتریایی در طول حفظ نمونه، باید برای تشخیص پس از بارش سنتریفوژ، ابرناتانت گرفته شود. یخ زدن نمونه های سرم باید به دلیل قطع برق اجتناب شود. نیروی براری مکانیکی تولید شده توسط فریز-thaw مکرر نمونه، پروتئین ها و دیگر مولکول های موجود در نمونه را از بین خواهد برد و در نتیجه نتایج منفی کاذب به دست می آورد. علاوه بر این باید به اختلاط نمونه های فریز-تاو نیز توجه کرد و نباید نوسان های خشونت آمیز انجام شود. اختلاط باید بارها معکوس شود.

در الیزا، به طور کلی سه مرحله برای اضافه کردن نمونه ها وجود دارد، که عبارت است از اضافه کردن مزدوگیت آنزیم، اضافه کردن بستر. پس از ذوب سرم یخ زده، پروتئین به صورت محلی متمرکز شده و به صورت ناهموار توزیع می شود. باید به طور کامل مخلوط شود، به آرامی و اجتناب از حباب. می توان آن را وارونه مخلوط کرد، و به شدت روی میکسر نوسان نمی کند. تهیه نمونه های پلاسمایی نیاز به کمک داروهای ضد انعقاد دارد، در حالی که نمونه های سرم را تنها پس از انعقاد طبیعی سرم و انقباض لخته های خون می توان به دست آورد. رقیق کننده را می توان به سوراخ صفحه نیز اضافه کرد، و سپس نمونه سرم به آن اضافه می شود، و سپس بر روی یک نوسان ساز میکرو به مدت ۱ دقیقه تکان می خورد تا از مخلوط شدن اطمینان حاصل شود. به طور کلی، نمونه های سرم اندازه گیری شده در عرض 5 روز را می توان در 4 درجه سانتی گراد ذخیره کرد، و نمونه هایی که بیش از یک هفته اندازه گیری می شوند نیاز به ذخیره در یخ سرد دارند. طیف گسترده ای از نمونه ها را می توان برای تعیین الایزا استفاده کرد. مایعات بدن (مانند سرم)، ترشحات (بزاق) و دفع (مانند ادرار، مدفوع) همگی می توانند به عنوان نمونه برای تعیین برخی اجزای آنتی بادی یا آنتی ژن مورد استفاده قرار گیرند. بخشی از کیت ELISA که در این آزمون مورد نیاز نیست باید به موقع در یخچال نگهداری شود.