آماده سازی و نیازهای واکنش دهنده مرغ Adrenomedullin (ADM)
Apr 06, 2021
1. سرم: انعقاد در دمای اتاق به مدت 10-20 دقیقه ، سانتریفیوژ به مدت 20 دقیقه با سرعت 2000-3000 دور در دقیقه. در صورت بروز بارندگی در هنگام ذخیره ، مایع رویی را با دقت جمع کرده و دوباره سانتریفیوژ کنید.
2. پلاسما: EDTA یا سدیم سیترات باید با توجه به نیاز نمونه به عنوان ضد انعقاد انتخاب شود. پس از 10-20 دقیقه مخلوط کردن ، به مدت 20 دقیقه با سرعت 2000-3000 دور در دقیقه سانتریفیوژ کنید. در صورت تشکیل بارندگی در هنگام ذخیره ، مایع رویی را با دقت جمع کرده و دوباره سانتریفیوژ کنید.
3. ادرار: با لوله استریل جمع شده و به مدت 20 دقیقه با سرعت 2000-3000 دور در دقیقه سانتریفیوژ کنید. در صورت تشکیل بارندگی در هنگام ذخیره ، مایع رویی را با دقت جمع کرده و دوباره سانتریفیوژ کنید. مایع قفسه سینه و شکم ، اجرای مرجع مایع مغزی نخاعی.
4. مایع رویی کشت سلول: هنگام تشخیص اجزای برون ریز ، با لوله استریل جمع آوری می شود. به مدت 20 دقیقه با سرعت 2000-3000 دور در دقیقه سانتریفیوژ کنید. با دقت مایع رویی را جمع کنید. هنگام شناسایی اجزای موجود در سلول ها ، سوسپانسیون سلولی با PBS رقیق شد (pH 7 / 7-7 / 4) و غلظت سلول به حدود 1 میلیون در میلی لیتر رسید. از طریق انجماد و ذوب مکرر ، سلول ها از بین رفته و اجزای داخل سلولی آزاد می شوند. به مدت 20 دقیقه با سرعت 2000-3000 دور در دقیقه سانتریفیوژ کنید. با دقت مایع رویی را جمع کنید. اگر بارش هنگام حفظ ایجاد شد ، دوباره سانتریفیوژ کنید.
5. نمونه بافت: پس از برش نمونه ، آنرا وزن کنید. مقدار مشخصی PBS ، PH7.4 اضافه کنید. انجماد سریع در نیتروژن مایع برای استفاده بعدی. نمونه پس از ذوب شدن در دمای 8-8 remains باقی می ماند. مقدار مشخصی PBS (PH7.4) اضافه شد و نمونه به طور کامل با دست یا با هموژنایزر همگن شد. به مدت 20 دقیقه با سرعت 2000-3000 دور در دقیقه سانتریفیوژ کنید. با دقت مایع رویی را جمع کنید. یکی را برای آزمایش تقسیم کنید و بقیه را برای ذخیره منجمد کنید.
6. نمونه ها باید در اسرع وقت پس از جمع آوری استخراج شوند. استخراج باید طبق ادبیات مربوطه انجام شود و آزمایشات باید در اسرع وقت پس از استخراج انجام شود. اگر آزمایش بلافاصله انجام نشود ، می توان نمونه را در دمای 20- نگهداری کرد ، اما باید از انجماد و ذوب مکرر خودداری شود
7. نمیتوان نمونه حاوی NaN3 را شناسایی کرد ، زیرا NaN3 فعالیت HRP را مهار می کند.
