شرح
مشخصات
استفاده در نظر گرفته شده: از این آزمایش برای تشخیص آنتی بادی ها در برابر بروسلا سقط (گاو) و بروسلا مالتی (گوسفند و بز) استفاده می شود.
نمونه: سرم
مواد مورد نیاز اما ارائه نشده است:
روشهای آزمون و تفسیر
مرحله 1 روش آزمون
1.1 آماده سازی محلول شستشو
Wغلظت ارکینگ wمایع ashing:قبل از استفاده ، محلول شستشو باید به دمای اتاق (درجه {0}} درجه) بازگردد و به طور مساوی متزلزل شود تا آن را یکنواخت کند. سپس 20 برابر محلول شستشوی غلیظ با آب خالص (به عنوان مثال ، محلول شستشوی غلیظ 5 میلی لیتر به آب خالص 95 میلی لیتر اضافه می شود) ، خوب مخلوط کنید ، و مایع شستشوی رقیق شده را می توان به مدت 7 روز در درجه {4}} ذخیره کرد.
1.2 آماده سازی نمونه
خون حیوانی - در 4000 دور در دقیقه به مدت 10 دقیقه سانتریفیوژ شد ، و Supernatant جمع آوری شد. سرم همچنین می تواند به طور طبیعی بدون همولیز منعقد شود.
- هنگامی که اندازه نمونه بزرگ است ، به منظور اطمینان از سازگاری زمان واکنش تجربی. نمونه سرم را با محلول کار آنتی بادی در 1: 1 در صفحه رقیق سازی (نمونه سرم 70UL {3}} uL محلول کار آنتی بادی) مخلوط کنید. کنترل منفی و کنترل مثبت همان نمونه سرم است.
1.3 روش تست
microplate برچسب آنزیم را بکشید (با توجه به تعداد نمونه ها ، می توانید چندین بار از هم جدا شده و استفاده کنید) ، هر یک برای کنترل های منفی و مثبت دو چاه را تنظیم کنید ، 100UL از مخلوط پیش از این را به میکروپلیت برچسب آنزیم اضافه کنید. با استفاده از فیلم صفحه آب بندی برای پوشاندن صفحه ، نمونه را به آرامی در چاه تکان دهید و به مدت 30 دقیقه در 37 درجه انکوبه کنید.
the فیلم صفحه آب بندی را باز کنید ، محلول را در چاه در صفحه تکان دهید ، 300 میکرولیتر مایع شستشوی غلظت کار را به هر چاه اضافه کنید و سپس مایع را در چاه دور کنید. مراحل فوق را 5 بار تکرار کنید و در آخر روی یک کاغذ جاذب تمیز خشک کنید.
③Dترکیب آنزیم iluted:کونژوگه آنزیم (50 × 50) را 50 بار رقیق کنید (به عنوان مثال: کنسانتره کونژوگه 20ul آنزیم {3}} ul رقیق 1 ، مقدار خاص مورد نیاز با توجه به تعداد نمونه های آزمایش محاسبه می شود) ، خوب مخلوط کرده و کنار بگذارید.
100 میکرولیتر از آنزیم به هر چاه کونژوگه شده ، صفحه را بپوشانید و به مدت 30 دقیقه در 37 درجه انکوبه کنید.
صفحه آنزیم شستشو ، عملکرد خاص همانند فوق است.
محلول بستر 100 میکرولیتر برای هر چاه ، صفحه را بپوشانید و به مدت 10 دقیقه با 37 درجه دور از نور انکوبه کنید.
محلول متوقف شده 50 میکرولیتر برای هر چاه ، و نتیجه را در مدت 5 دقیقه تعیین کنید.
مرحله 2 تفسیر نتیجه
مقدار OD450 از هر چاه در خواننده میکروپلیت {1}}} خوانده شد.
اعتبار سنجی 2.1
میانگین مقدار OD45 {1} nm nm کنترل مثبت <0.35 و میانگین مقدار OD450nm از کنترل منفی/کنترل مثبت بیشتر از یا مساوی با 3.5 بود ، نتایج تجربی معتبر بود. در غیر این صورت ، آزمایش باید تکرار شود.
2.2 روش محاسبه
برای هر نمونه ، PI (انسداد Ate) را به شرح زیر با استفاده از نمونه و مقادیر کنترل شده محاسبه کنید:
2.3 تفسیر نتیجه
هنگامی که PI <20 ٪ ، به عنوان منفی قضاوت می شود.
هنگامی که PI> 30 ٪ ، به عنوان مثبت قضاوت می شود.
هنگامی که 20 ٪ کمتر از یا مساوی با PI کمتر از یا مساوی 30 ٪ ، به عنوان مشکوک قضاوت می شود و پیشنهاد می کنید یک هفته بعد نمونه برداری را تکرار کنید و آزمایش کنید.
تگ های محبوب: آنتی بادی Brucella Elisa Kit ، آنتی بادی Brucella آنتی بادی ELISA کیت ، تولید کنندگان ، کارخانه
